今天跟大家分享的是關(guān)于核酸電泳的兩種分類(lèi)，下面就讓我們一起來(lái)了解一下吧。
 

　　一、瓊脂糖凝膠電泳
 

　　1.原理
 

　　瓊脂糖是從海藻中提取出來(lái)的一種線狀高聚物。將瓊脂糖在所需緩沖液中加熱熔化成清澈、透明的溶膠，然后倒入膠模中，凝固后將形成一種固體基質(zhì)，其密度取決于瓊脂糖的濃度。
 

　　將凝膠置電場(chǎng)中，在中性pH值下帶電荷的核酸通過(guò)凝膠網(wǎng)孔向陽(yáng)極遷移，遷移速率受到核酸的分子大小、構(gòu)象、瓊脂糖濃度、所加電壓、電場(chǎng)、電泳緩沖液、嵌入染料的量等因素影響。
 

　　在不同條件下電泳適當(dāng)時(shí)間后，大小、構(gòu)象不同的核酸片段將處在凝膠不同位置上，從而達(dá)到分離的目的。瓊脂糖凝膠的分離范圍較廣，用各種濃度的瓊脂糖凝膠可分離長(zhǎng)度為200bp至50kb的DNA。
 

　　2.瓊脂糖凝膠電泳的儀器及試劑 儀器設(shè)備應(yīng)包括水平凝膠電泳槽及其配套電泳梳、穩(wěn)壓電泳儀、微波爐或普通電爐。同時(shí)配備紫外線檢測(cè)儀和照相系統(tǒng)。
 

　　二、聚丙烯酰胺凝膠電泳
 

　　1.原理 聚丙烯酰胺凝膠通過(guò)丙烯酰胺單體、鏈聚合催化劑N，N，N'，N'-四甲基乙二胺(TEMED)和過(guò)硫酸銨以及交聯(lián)劑N，N'-亞甲雙丙烯酰胺之間的化學(xué)反應(yīng)而形成。
 

　　丙烯酰胺單體在催化劑作用下產(chǎn)生聚合反應(yīng)形成長(zhǎng)鏈，長(zhǎng)鏈經(jīng)交聯(lián)劑作用交叉連接形成凝膠，其孔徑由鏈長(zhǎng)和交聯(lián)度決定。鏈長(zhǎng)取決于丙烯酰胺的濃度，調(diào)節(jié)丙烯酰胺和交聯(lián)劑的濃度比例，可改變聚合物的交聯(lián)度。
 

　　聚丙烯酰胺凝膠電泳可根據(jù)電泳樣品的電荷、分子大小及形狀的差別達(dá)到分離目的，兼具分子篩和靜電效應(yīng)，分辨力高于瓊脂糖凝膠電泳?？煞蛛x只相差1個(gè)核苷酸的DNA片段。
 

　　聚丙烯酰胺凝膠電泳用于分析和制備長(zhǎng)度小于1kb的DNA片段。根據(jù)所要分離的核酸片段大小，可制備不同濃度的凝膠。
 

　　2.凝膠的制備和電泳 由于氧能抑制丙烯酰胺的聚合反應(yīng)，灌制聚丙烯酰胺凝膠常在兩塊封閉的玻璃平板所形成的夾層間進(jìn)行。在這種裝置形式下，僅有頂層的凝膠與空氣中的氧氣相接觸，從而大大減少了氧對(duì)聚合的抑制作用。聚丙烯酰胺凝膠電泳一般采用垂直裝置。